高效液相色谱仪（HPLC）的系统压力稳定性是仪器正常运行的核心指标，通常反相色谱常规操作压力范围为800-2000psi，压力超过设定阈值或突然升高超过300psi以上，会导致流速不稳、峰形畸变、部件磨损，甚至损坏泵体、色谱柱等关键组件，直接影响分析工作的连续性与数据可靠性。压力过高是HPLC使用中的故障之一，成因多与管路堵塞、部件污染、操作不当、色谱柱问题等相关。本文结合仪器结构与实操经验，系统梳理压力过高的核心成因，配套简要排查思路，为实验室高效解决故障提供参考。
一、色谱柱相关成因（最核心常见因素）
色谱柱是系统压力的主要承载部件，其内部填料堵塞、污染或性能衰减是导致压力过高的首要原因。其一，样品基质污染，样品中未过滤的悬浮物、蛋白质、油脂等杂质，会随流动相进入色谱柱，沉积在填料表面或孔隙中，逐步堵塞流道，导致液流阻力增大、压力攀升。尤其在分析复杂基质样品（如血浆、食品提取液）时，若前处理（过滤膜孔径过大、未离心除杂），污染问题会更突出。
其二，流动相污染或不当使用，流动相未过滤（未通过0.45μm滤膜）、储存过程中滋生微生物，或混入有机杂质，会随液流进入色谱柱，堵塞填料孔隙；同时，流动相pH值超出色谱柱耐受范围（如反相柱通常耐受pH2-8），会导致填料键合相水解、颗粒塌陷，使柱内流道变窄，压力骤升。此外，不同类型流动相混合不当产生沉淀（如缓冲液与有机溶剂配比失衡），沉淀会直接堵塞色谱柱入口，引发压力急剧升高。
其三，色谱柱老化或损坏，长期使用后填料颗粒磨损、破碎，或柱床塌陷，会导致柱内阻力增大；色谱柱入口筛板堵塞也是常见问题，筛板孔径细小（通常为2μm），易被杂质堵塞，使压力逐步升高，表现为基线稳定但压力持续上升。
二、管路与连接件堵塞或异常
HPLC系统管路纤细，连接件众多，任何部位的堵塞、变形或密封不当，都会导致液流阻力增加，引发压力过高。其一，进样系统污染堵塞，进样针、进样阀残留样品杂质，或进样阀转子密封垫磨损，会导致样品通路堵塞；进样口滤器（若配备）被杂质堵塞，也会阻碍液流，使压力升高，此类问题多伴随进样后压力突然波动。
其二，溶剂滤头堵塞，溶剂瓶内的溶剂滤头（又称吸滤头）用于过滤流动相中的杂质，若长期未清洗、更换，或流动相污染严重，滤头孔隙会被堵塞，导致泵吸液阻力增大，系统压力升高，同时可能伴随流速不稳、泵体异响。此外，滤头若吸附微生物、有机凝胶，也会影响液流顺畅性。
其三，管路堵塞或变形，系统管路（尤其是泵出口至色谱柱入口、色谱柱出口至检测器入口段）若被流动相沉淀、样品杂质堵塞，或因安装不当、碰撞导致管路弯折、变形，会缩小液流通道，增加阻力；连接件（接头、卡套）松动、密封不严，虽不会直接导致堵塞，但可能因漏液引发压力波动，若漏液部位伴随杂质沉积，后续会逐步发展为堵塞，导致压力升高。
三、泵体部件故障或污染
泵体是系统液流的动力源，其部件污染、磨损或故障会直接导致压力异常升高。其一，泵头污染堵塞，泵头内的单向阀、密封圈、柱塞杆残留流动相沉淀、样品杂质，或长期使用后积累磨损碎屑，会阻碍液流输送，导致泵腔压力升高，表现为系统压力持续偏高且波动较大。单向阀堵塞是典型问题，杂质附着在阀芯上，会影响阀门开合，使液流无法顺畅通过，压力骤升。
其二，柱塞杆磨损或密封圈老化，柱塞杆与密封圈长期摩擦导致磨损，会使泵腔密封性能下降，为维持设定流速，泵体需增大压力，导致系统压力升高，同时可能伴随泵头漏液；密封圈老化、变形也会引发类似问题，漏液伴随压力异常。此外，泵腔内部污染未及时清理，会加剧部件磨损，进一步恶化压力问题。
四、检测器及辅助部件异常
检测器流通池及后续管路异常，也可能导致系统压力升高，此类问题多在压力传导至检测器后显现。其一，通池堵塞，检测器流通池孔径极小（通常为几微米至几十微米），若流动相含杂质、微生物，或样品未过滤，杂质会沉积在流通池内，堵塞液流通道，导致压力升高，同时伴随基线波动、检测信号异常（如出现尖峰、基线漂移）。
其二，辅助部件异常，若系统配备在线脱气机、柱温箱，脱气机管路堵塞、柱温箱内管路弯折，或柱温设置过低（流动相粘度增大，液流阻力增加），也会间接导致系统压力升高。此外，废液管路堵塞、回压过大，会使整个系统液流受阻，压力逐步攀升。
五、操作及环境因素引发的压力过高
不规范操作与环境因素虽非直接成因，但会诱发或加剧压力问题。其一，速设置过高，超出色谱柱及管路耐受范围，会导致系统压力按流速平方倍增长，尤其是色谱柱老化后，耐受流速降低，盲目升高流速会使压力骤升。其二，梯度洗脱参数设置不当，流动相比例突变（如有机溶剂比例快速升高），可能导致缓冲液析出沉淀，堵塞管路与色谱柱；温度变化过大（如环境温度过低，流动相粘度增大），也会使液流阻力增加，压力升高。
其三，样品进样量过大或浓度过高，过量样品进入色谱柱，会导致填料过载，杂质堆积速度加快，短期内心压力逐步升高；高浓度样品中的杂质含量更高，会加速管路、色谱柱的堵塞进程。此外，实验结束后未及时冲洗系统，流动相残留于管路、色谱柱内，易滋生微生物或产生结晶，下次开机时会出现压力过高。
六、故障排查核心原则
排查压力过高问题需遵循“从简单到复杂、从外部到内部"的原则：先检查流速设置、流动相状态、溶剂滤头，排除基础因素；再通过分段断开管路（如断开色谱柱入口，检查泵出口压力），定位压力过高的区段；最后针对对应部件（管路、进样系统、色谱柱、泵体）进行清洗、更换或维修。日常做好仪器维护，规范样品前处理与流动相制备，定期清洗管路、部件，可大幅降低压力过高故障的发生率。
