液相色谱（HPLC）分析中，流动相及管路内的气泡是影响检测准确性、仪器稳定性的常见问题。气泡的存在会导致基线漂移、峰形畸变、保留时间波动，严重时还会损坏泵体密封件、堵塞色谱柱，干扰定量分析结果。因此，及时有效的脱气处理是HPLC分析前及运行中的关键操作。本文结合仪器结构与实际应用，详细介绍气泡产生的原因及各类脱气方法的操作要点、适用场景。
一、气泡产生的主要原因
HPLC系统中的气泡主要来源于流动相本身、系统泄漏及操作不当。流动相在制备过程中会溶解空气中的氧气、氮气等气体，温度升高、压力降低时，气体溶解度下降，便会析出形成气泡；系统管路接头松动、泵密封磨损等泄漏问题，会使空气进入管路；此外，流动相混合时的搅动、样品进样过程中带入的空气，也会导致气泡产生。不同来源的气泡在系统中分布不同，需针对性选择脱气方法。
二、常用脱气方法及操作规范
（一）超声脱气法
超声脱气是实验室离线脱气方法，具有操作简便、成本低、适用范围广的特点。其原理是利用超声波的空化效应，使流动相中的气泡破裂并逸出液面，同时加速气体扩散，达到脱气目的。
操作步骤：将配制好的流动相装入密封容器中，液面距容器口1-2cm，避免脱气时液体飞溅；将容器放入超声波清洗仪，确保液面高于超声探头位置，开启超声仪，功率设置为80-120W，脱气时间根据流动相体积调整，一般10-20分钟。对于混合流动相，建议先分别脱气再混合，减少混合后气泡再次析出。
注意事项：超声脱气后需静置5-10分钟，待残留微小气泡上浮；避免长时间超声导致流动相组分挥发，尤其是易挥发性有机溶剂（如甲醇、乙腈）；含盐流动相超声时需注意密封，防止水分蒸发导致浓度变化。该方法适合样品前处理及流动相批量脱气，脱气效果有限，无法去除溶解态微量气体。
（二）真空脱气法
真空脱气法通过降低体系压力，使流动相中溶解的气体达到过饱和状态并析出，再通过真空泵将气体抽出，脱气效率优于超声脱气，可分为离线真空脱气和在线真空脱气。
离线真空脱气操作：将流动相置于真空干燥器中，连接真空泵，控制真空度在0.08-0.1MPa，脱气15-30分钟，期间定期摇晃容器，促进气泡释放。该方法适合高粘度流动相及对超声敏感的样品体系，但操作耗时，且脱气后需快速转移至仪器储液瓶，避免再次吸潮进气。
在线真空脱气是主流的仪器集成脱气方式，通过仪器内置的真空脱气装置，实时对流动相进行脱气。脱气装置通常由脱气膜、真空泵组成，流动相流经多孔性脱气膜时，膜一侧为流动相，另一侧为真空环境，气体通过膜扩散被抽出。在线真空脱气可实现连续脱气，适配梯度洗脱，能有效避免分析过程中气泡产生，是高精度分析的方法。操作时需定期检查脱气膜完整性，防止膜破损导致流动相泄漏。
（三）氦气脱气法
氦气脱气法属于惰性气体吹扫脱气，原理是利用氦气在流动相中溶解度极低的特性，通入氦气置换出溶解的空气，可去除99%以上的溶解气体。
操作步骤：将氦气钢瓶通过减压阀连接至流动相储液瓶，调节氦气流量为1-3mL/min，使氦气以微小气泡形式通入流动相底部，吹扫10-15分钟后，保持轻微正压继续通气，维持脱气效果。该方法适合梯度洗脱、低波长检测及对基线稳定性要求的分析场景，如氨基酸分析、痕量杂质检测。
注意事项：氦气为惰性气体，成本较高，需合理控制流量；通气时避免气泡剧烈搅动流动相，防止组分混合不均；钢瓶使用需符合安全规范，定期检查管路密封性。
（四）加热脱气法
加热脱气法利用气体溶解度随温度升高而降低的规律，通过加热流动相促进气体析出。操作时将流动相加热至40-60℃，保温10-20分钟，同时搅拌或通入少量惰性气体，加速气泡逸出，冷却至室温后使用。
该方法适合对热稳定的流动相，脱气效率较高，但需注意避免流动相组分挥发、分解，或含盐流动相结晶析出。加热后需充分冷却，防止高温流动相对色谱柱、检测器造成损坏，一般仅用于特殊体系的辅助脱气。
三、系统内气泡的排除技巧
若脱气导致气泡进入仪器管路，需及时排除，避免影响分析。对于泵体气泡，可关闭检测器，开启泵以2-5mL/min的流速冲洗管路，同时打开泵排气阀，直至排气口流出无气泡的流动相；对于进样器气泡，可反复推拉进样针，排出残留空气，或用流动相冲洗进样通道；对于色谱柱及检测器管路气泡，可提高流速冲洗，必要时反向冲洗色谱柱（需确认色谱柱可反向使用）。
四、脱气方法的选择与优化
实际应用中需根据分析需求、流动相性质及仪器配置选择合适的脱气方法：常规定性分析可采用超声脱气；批量样品前处理适合离线真空脱气；高精度定量分析、梯度洗脱优先选用在线真空脱气或氦气脱气；热稳定流动相可搭配加热脱气辅助。此外，可通过组合脱气提高效果，如超声脱气后再进行在线真空脱气，兼顾成本与效率。
同时，需做好预防措施：流动相制备后及时脱气，储液瓶密封保存，减少与空气接触；定期检查仪器管路、接头、密封件，避免泄漏进气；分析前用脱气后的流动相充分冲洗系统，排除残留气泡。
五、结语
气泡问题是HPLC分析中不可忽视的干扰因素，脱气处理的有效性直接决定检测结果的可靠性。不同脱气方法各有优劣，需结合实际场景合理选择，同时注重操作规范与系统维护。通过科学的脱气流程与气泡排除技巧，可有效避免基线波动、峰形异常等问题，保障液相色谱分析仪稳定运行，提高分析数据的准确性与重复性。在实际工作中，还需根据流动相组成、仪器性能不断优化脱气参数，适配不同分析需求。
