高效液相色谱仪（HPLC）作为复杂样品分离分析的核心设备，其管路、色谱柱、进样阀等关键部件的洁净度直接决定分离效率、峰形对称性及检测数据准确性。样品中的金属离子残留、有机污染物吸附及管路氧化层等问题，易导致保留时间漂移、峰展宽、柱效下降等故障。酸清洗可有效去除金属离子和顽固污染物，钝化处理能在管路表面形成保护膜减少吸附，二者结合是HPLC设备运维的关键技术。本文结合实验室实操经验，系统梳理高效液相色谱仪酸清洗与钝化的规范方法，为实验室人员提供标准化操作指引。
一、酸清洗与钝化前的核心准备：安全为先，精准适配
前期准备需兼顾安全防护、设备适配性及试剂合规性，避免操作风险与设备损伤。安全防护方面，需穿戴耐酸手套、护目镜、防化服及防毒面具，在通风橱内进行操作，防止硝酸、盐酸等腐蚀性试剂接触皮肤或挥发污染环境。设备预处理上，先关闭泵、检测器等模块电源，卸下色谱柱（替换为两通管路），取下进样针和样品瓶，用去离子水冲洗进样阀3-5次，排空系统内残留流动相。试剂与工具准备需匹配设备材质，不锈钢管路可选用10%硝酸溶液，钛合金部件需降低酸浓度至5%，同时备齐去离子水（电阻率≥18.2MΩ·cm）、甲醇、超声清洗仪、专用管路刷及pH试纸，确保试剂均为分析纯级别。
二、酸清洗关键流程：分部件精准除污，控速控时防损伤
酸清洗需按“管路系统→进样系统→检测系统"顺序操作，严格控制流速、浓度与时间，兼顾除污效果与设备保护。管路系统清洗是核心，先将流动相瓶更换为10%硝酸溶液，开启输液泵以0.5mL/min低速运行，让酸液充满管路，关闭泵浸泡30分钟，期间每隔10分钟启动泵运行1分钟，增强对管路内壁污染物的溶解。浸泡后以1.0mL/min流速持续冲洗30分钟，再更换去离子水冲洗至流出液pH值中性（用pH试纸验证）。进样系统需拆解清洗，进样针用5%硝酸溶液超声清洗20分钟，再用去离子水冲洗至中性；进样阀取下阀芯后，用蘸有10%硝酸的无尘布擦拭阀芯与阀腔，重点清洁进样口和定量环接口，清洗后用去离子水冲洗并晾干。检测器流通池清洗需格外谨慎，以0.3mL/min流速泵入5%硝酸溶液冲洗20分钟，再用去离子水冲洗至中性，避免高浓度酸液腐蚀检测元件。
三、钝化处理核心技术：形成稳定氧化膜，减少吸附与腐蚀
钝化处理主要针对不锈钢管路和部件，通过氧化作用形成致密氧化膜，降低金属离子溶出和污染物吸附。常用钝化试剂为20%硝酸溶液，操作前需确保管路已完成酸清洗并冲洗至中性。将流动相瓶更换为20%硝酸溶液，开启输液泵以0.8mL/min流速运行，使钝化液充分接触管路内壁，运行30分钟后关闭泵，浸泡2小时（不锈钢材质可延长至4小时，钛合金材质缩短至1小时）。浸泡完成后，先以1.0mL/min流速用去离子水冲洗60分钟，直至流出液pH值稳定为中性，再用甲醇以1.0mL/min流速冲洗30分钟，去除管路内残留水分，防止微生物滋生。钝化过程中需注意，若设备含铜质部件，需避免使用硝酸钝化，改用5%柠檬酸溶液替代，防止铜部件腐蚀。
四、关键部件专项处理：针对性解决高污染风险点
色谱柱、进样阀转子密封垫等易污染部件需采取专项处理措施。色谱柱若出现金属离子污染导致峰形拖尾，可采用含0.05%乙二胺四乙酸二钠的流动相以0.5mL/min流速冲洗2小时，再用纯甲醇冲洗30分钟活化；若为有机污染物吸附，可依次用甲醇、乙腈以1.0mL/min流速各冲洗60分钟。进样阀转子密封垫易残留样品，清洗时需先卸下密封垫，用甲醇超声清洗15分钟，再用去离子水冲洗，晾干后涂抹专用硅脂安装，确保密封良好。检测器氘灯窗口若有污染物沉积，需用无尘布蘸取少量甲醇轻轻擦拭，避免使用酸液直接清洗，防止损坏光学元件。
清洗与钝化后验证：数据与性能双重确认
处理完成后需通过设备运行验证和数据验证确保效果。设备运行验证方面，安装色谱柱后，以甲醇-水（50:50）为流动相，以1.0mL/min流速运行，观察压力曲线是否平稳（波动范围≤0.5MPa），进样阀切换时是否无泄漏。数据验证需进行空白试验和标准样品检测，空白试验中基线噪音应≤5×10⁻⁵AU，无杂峰干扰；标准样品（如萘、苯系物混合标样）检测时，保留时间相对偏差≤0.5%，峰形对称因子为0.9-1.1，柱效较处理前提升≥10%，表明清洗与钝化达到预期效果。同时需建立运维档案，记录清洗钝化时间、试剂浓度、处理部件及验证数据，为后续定期维护提供依据。
高效液相色谱仪酸清洗与钝化需遵循“精准选剂、分件处理、控时控速、验证闭环"原则，根据设备材质和污染类型调整方案。日常使用中建议每3个月进行一次常规酸清洗，每6个月进行一次钝化处理，对于高盐、高金属离子样品检测场景，需缩短处理周期至1-2个月。通过规范操作可有效减少污染物干扰，维持设备分离效能，延长色谱柱等关键部件寿命，为精准检测提供可靠保障。
