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液质联用仪在ADC抗体偶联药物分析作用

发布时间:2022-12-07      点击次数:140

ADC既具有大分子药物的特异性,又具有小分子药物的细胞独性,且ADC在研发过程中均需要对其抗体部分和小分子药物部分进行生物定量,LC-MS/MS和LC-HRMS技术正越来越多的被用于大分子表征和定量。

与传统ELISA方法相比,LC-MS方法开发周期更短,方法的通用性更好;且基于高分辨质谱的LC-HRMS,在对大分子进行定量的同时,还可以对ADC类药物的DAR值进行测定,助力完善ADC的生物表征。


LC-MS/MS法定量测定总ADC


通常流程可以分成三个环节。

第一亲和免疫捕获,借助对ADC抗体部分具有特异性结合的抗体或抗原对目标总抗进行纯化;第二步是酶解,生成抗体的特征多肽;后利用LC-MS/MS进行检测定量。


在这种方法中,使用抗payload抗体捕获ADC。与基于LC-MS/MS的TAb分析类似,来自人Fc区或CDR区的肽被用作非临床研究的标志肽,而对于临床研究,来自CDR区的标志肽被使用。


LC-MS/MS法定量测定总ADC偶联有效载荷


偶联有效载荷分析的目的是测量与抗体结合的有效载荷分子的浓度。偶联有效载荷涉及有效载荷的直接测量,因此可以提供对靶标部位的有效载荷暴露的更准确的评估,并且可以提供暴露量与疗效的相关性。


LC-MS/MS是偶联有效载荷测量的主要平台。在基于LC-MS/MS偶联有效载荷分析中,捕获剂是针对ADC分子的Ab组分的。因此,免疫捕获步骤类似于基于LC-MS/MS的Tab分析法。一旦用免疫亲和的方法分离,有效载荷分子从ADC释放,并用LC-MS/MS测量切割的有效载荷,根据连接子化学,酶反应或化学反应被用于从ADC切割有效载荷。虽然偶联有效载荷分析中的替代分析物是一种小分子药物,但免疫捕获技术的使用保证了该分析的大分子生物分析方法验证指南。


LC-MS/MS法定量偶联有效载荷有其局限性。主要的限制是在分析带有不可切割连接子的ADC时,在ADC免疫亲和分离后,ADC的抗体成分需要蛋白分解以释放用于替代分析物的多肽-连接子偶联的有效载荷。在这些情况下,参考标准和稳定的标记IS可能不易获得。此外,不可切割的、基于赖氨酸的随机偶联ADC带来了挑战,因为它们在ADC分子蛋白分解后形成多个连接到有效载荷的多肽片段。


游离型独性小分子的LC-MS/MS定量分析


在ADC药物的生产过程中,往往需要将多余的独性小分子尽可能去除,由于其具有超高的独性,轻微的残留也会对ADC药物的安全性带来更大隐患。对于体内实验,游离型独性小分子可能来自ADC在血浆中的释放和目标组织的释放,血浆中的游离型独性小分子对应着ADC的脱靶独性,是ADC性能考察的重要组成部分。


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